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KANEKA KanCapA™

高機能プロテインA クロマトグラフィーレジン KANEKA KanCapA

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環境事業

高機能プロテインA クロマトグラフィーレジン KANEKA KanCapATMKanCapA

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分子デザインにより改変したFc領域に特異的に結合する新規高機能プロテインAアフィニティークロマトグラフィー用のセルロース担体です。 優れたアルカリ耐性と高い抗体結合容量があります。バイオ医薬品の研究開発に有用です。

※本製品は研究用です。臨床用途には使用できません。

※KANEKA KanCapAは、株式会社カネカの登録商標です。

KanCapA Ligandについて
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天然型のProteinA のC末端ドメインは、抗体のFc領域だけでなく、Fab領域にも結合します。Protein Aが抗体のFc領域とFab領域の両方に結合している場合、抗体を溶出するには、酸性度の高い溶液が必要となります。

カネカKanCapAは、変異したProtein AのCドメインを五量体化させたタンパク質で、高アルカリ耐性を有し、Fab(Fragment Antigen Binding)への結合能が減少しています。そのため、マイルドな条件での抗体の溶出が可能となります。

KANEKA KanCapAの特徴

 

アルカリ耐性があり、繰り返し洗浄できます。しかもProtein Aの剥離がありません。

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Life cycle study
0.1 Mまたは0.5 MのNaOHでアルカリ性洗浄の繰り返し試験(左図)。
0.1 M水酸化ナトリウムで繰り返し試験を行ったときの収率およびProtein Aの浸出(右図)
接触時間:15分、検出限界未満(1ppm未満)のリガンド浸出は1ppとしてプロット。
 
 

マイルドなpH条件(弱酸性)で抗体溶出できます。

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溶出プロファイルの比較
5 mg/mLのレジンに IgG をロード。 溶出条件:pH 3.5 または 3.0,Strip solution:1 M Acetic acid.
カネカKanCapAは、 Fab結合部位がないため、狭いpH範囲でMabのすべてのタイプ(Mab A,Mab B,IgG)を

溶出することができます。

 
 
 

高い抗体結合能を示します。

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動的結合容量の滞留時間依存性
カネカKanCapAは4~6分の滞留時間で高い動的結合容量を示します。

 
 

速い流量での操作が可能で,スケールアップも容易です。

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様々なサイズのカラムにカネカKanCapAを充填したときの圧力/流速の関係
充填床の圧力は、全圧からシステム圧力を差し引くことによって計算しています。

 
 
 
 マトリックス  高架橋セルロース
平均粒径*1 65~85 μm
リガント 組換え体Protein A(アルカリ耐性)
結合 還元的アミノ化
動的結合容量*2 ≧35 mg (human polyclonal IgG/ml packed resin)
安定性 アフィニティクロマトグラフィー汎用試薬で安定
容量 pH2~13
洗浄条件 0.1~0.5 M 水酸化ナトリウム
流速 最大500 cm/h (層高:20~25 cm)
滞留時間 ≧3 min(推奨:4~6 min)
保存条件*3 20%エタノールの懸濁液の状態で1~10℃で保存

*1 平均粒径は、累積体積分布の中間粒径です。
*2 5%動的結合容量は、前端分析(滞留時間3分)で測定しています。
*3 凍結禁止

充填カラムの充填効率の評価(1%アセトンのパルスインジェクション)

Packing method I.D. (cm) Height (mm) Plates/m Asymmetry
Flow packing 4.4 200 5,710 1.14
Axial compression 7 199 6,063 1.06
Flow packing 10 201 5,276 1.18
Flow packing 30 200 5,208 1.17
Axial compression 45 233 4,712 1.09

測定条件

・試料:1%(v/v)アセトン
・インジェクションボリューム:カラム容量の1%

・流速:60 cm/h

 

充填カラムの圧力/流量特性および充填効率を示す(内径4.4~45 cm、高さ20 cm)。 10%グリセロール溶液を細胞培養溶液の代わりとしてシミュレートした結果、合理的な圧力上昇を示しています。 カネカKanCapを充填したカラムは、優れた圧力/流量特性を示します。

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